UHPLC色譜柱與傳統(tǒng)HPLC色譜柱相比，主要區(qū)別在于其能夠承受更高的壓力，并且使用了更小粒徑的固定相填料。
 

　　1.更高壓力
 

　　-UHPLC系統(tǒng)能夠在更高的壓力下驅(qū)動(dòng)流動(dòng)相通過色譜柱。這使得流動(dòng)相在柱內(nèi)的流速可以更快，同時(shí)保持較高的分離效率。高壓力可以使流動(dòng)相更有效地滲透到固定相的孔隙中，加速樣品組分的傳質(zhì)過程，從而縮短分析時(shí)間。
 

　　2.小粒徑固定相填料
 

　　-通常采用粒徑更小的固定相填料，一般為1.7-3μm左右，而傳統(tǒng)HPLC色譜柱填料粒徑通常在5μm以上。小粒徑填料具有更大的比表面積，能夠提供更多的活性位點(diǎn)，增強(qiáng)樣品組分與固定相之間的相互作用，從而提高分離效率和分辨率。同時(shí)，小粒徑填料也使得傳質(zhì)路徑更短，進(jìn)一步加快了傳質(zhì)速度，有利于快速分離。
 

　　UHPLC色譜柱的基礎(chǔ)原理：
 

　　在液相色譜中，樣品溶液通過色譜柱時(shí)，不同組分在固定相和流動(dòng)相之間發(fā)生分配、吸附、離子交換或尺寸排阻等相互作用。固定相是填充在色譜柱內(nèi)的顆粒或涂層，流動(dòng)相是攜帶樣品和洗脫組分的液體。
 

　　1.分配色譜
 

　　-基于樣品組分在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)差異進(jìn)行分離。當(dāng)流動(dòng)相攜帶樣品通過色譜柱時(shí)，組分在兩相之間不斷分配。分配系數(shù)大的組分在固定相中保留時(shí)間較長(zhǎng)，而分配系數(shù)小的組分則較快地隨流動(dòng)相流出色譜柱。
 

　　2.吸附色譜
 

　　-依靠固定相表面的活性位點(diǎn)對(duì)樣品組分的吸附作用。不同組分與固定相表面的親和力不同，親和力強(qiáng)的組分在固定相上停留時(shí)間長(zhǎng)，從而實(shí)現(xiàn)分離。
 

　　3.離子交換色譜
 

　　-固定相上帶有可交換的離子基團(tuán)，樣品中的離子與固定相上的離子進(jìn)行交換。不同離子與固定相離子交換能力不同，從而在色譜柱中實(shí)現(xiàn)分離。
 

　　4.尺寸排阻色譜
 

　　-根據(jù)樣品分子的尺寸大小進(jìn)行分離。色譜柱內(nèi)填充有具有特定孔徑的多孔填料，小分子可以進(jìn)入填料孔隙，而大分子被排斥在外，小分子在柱內(nèi)停留時(shí)間長(zhǎng)，大分子先流出色譜柱。